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    Donor vector

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       CRISPR是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。Cas9系统中,crRNA(CRISPR-derived RNA)与tracrRNA(trans-activating RNA)结合形成的复合物能特异性识别靶基因序列,并引导Cas9核酸内切酶在靶定位点剪切双链DNA,随后,细胞的非同源末端连接修复机制(NHEJ)重新连接断裂处的基因组DNA,并引入插入或缺失突变。多数基因组编辑过程产生单或双等位基因的比例在1-80%之间,并受制于实验室平台、细胞转染效率、细胞类型和靶点DNA?;谌绱硕啾涞谋嗉Ч?,下游细胞株的筛选十分困难。


       因此,在供体Donor载体上加入荧光或抗生素标记,对基因的敲入、敲除及其有效。中洪博元生物提供多种抗性或荧光的Donor载体,并可以选择使用普通载体瞬转,或使用超高滴度的腺病毒载体输送供体DNA和Cas9蛋白。突变型Cas9(通常为D10A)设计为只切断gRNA靶位点DNA的一条链,再通过Donor DNA被同源定向修复(HDR)修复,比NHEJ更不易出错。



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