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    shRNA表达克隆

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       shRNA表达克隆是将针对靶基因设计shRNA(小发夹结构RNAi)靶点序列,然后将其装于表达载体中,我公司现可提供4套表达载体,可用于对人、小鼠、大鼠以及其他物种的全基因组范围的基因表达抑制研究。我公司还提供相应的全长人类和小鼠基因的ORF表达克隆,可用于相应基因的功能获得研究,还可用于shRNA克隆的确证。
    图1. 使用H1 或 U6 启动子的表达载体构建的shRNA克隆

       shRNA表达克隆的特性    
    1.所有shRNA靶点序列的选取均经过准确算法计算。根据基因的不同, shRNA其茎的长度在19到29碱基对之间。这些保证shRNA克隆表达后有很高的表达抑制效率和最低的脱靶效应(off target effect)。


    2.克隆shRNA 所采用的载体有慢病毒载体和以哺乳动物细胞为宿主的载体,各类载体拥有不同的启动子和跟踪标记基因可供选择。


    3.载体中所带有的绿色荧光跟踪标记基因( eGFP )可以用于监测质粒载体的转染效率和转导病毒的感染效率。


    4.载体结构上带有稳定细胞株的筛选标记(嘌呤霉素)和绿色荧光跟踪标记基因(EGFP ),这些特性使得该载体既能用于稳定抑制效应的研究,也

    5.可用于瞬时抑制效应的研究。


    6.使用慢病毒载体系统,可转导shRNA进入常规的分裂细胞,以及不分裂而难以转染的目的细胞株。


    7.载体的各部分序列已经过测序,包括启动子、编码shRNA的正义和反义链、发夹结构、终止子和其他接头序列。

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